-
Puhelin
+86-0755 2308 4243
-
Osoite
Room 309, Meihua Building, Taiwan Industrial Park, No.2132 Songbai Road, Bao'an District, Shenzhen, Kiina
-
Sähköposti
FAQ
Mitä synteesimenetelmiä Biorunstar käyttää peptidisynteesiin?
RE: Biorunstar on kehittänyt erilaisia ratkaisuvaiheen synteesimenetelmiä vastatakseen asiakkaiden tarpeisiin. Yleensä käytetään kiinteäfaasista Fmoc-kemiaa.
Kuinka lähetät peptidejä? Mitä QC-tietoja toimitetaan?
RE: Kaikki peptidit toimittaa DHL tai FedEx express kylmäkuivattuna jauheena yksittäisissä hyvin leimatuissa pulloissa huoneenlämmössä. Lukuun ottamatta raakapeptidejä, jotka tarkistetaan vain MALDI-MASS-spektrometrialla, kaikkien synteettisten puhdistettujen peptidien mukana tulee projektiraportti (CoA), MS-tiedot ja HPLC-tiedot. toimitetaan tietolomakkeet, jotka sisältävät tärkeimmät ominaisuudet, kuten peptidisekvenssin, puhtauden, määrän, modifikaatiot, massaspektritiedot ja HPLC-tiedot.
Mikä on tyypillinen peptidisynteesin läpimenoaika? Kuinka kauan toimitus kestää minulle?
RE: Tyypillinen läpimenoaikamme on 2-3 viikkoa alle 30 aminohapon standardipeptidille. Kääntymisaika vaihtelee riippuen peptidin pituudesta, määrästä, liukoisuudesta ja vaikeudesta. Tyypillisesti 3-5 päivää muiden maiden tutkijoiden tavoittamiseen.
Kuinka kauan pystyt syntetisoimaan?
RE: Biorunstarilla on laaja kokemus pitkien, jopa 130 aa:n peptidien syntetisoinnista. Toisin kuin monet peptidien toimittajat, jotka ovat miellyttäviä valmistamaan alle 30 tai 40 aa:n peptidejä, Biorunstarilla on hyvä kokemus 40-90 aa:n peptidien valmistamisesta. On vaikeaa syntetisoida pitkiä peptidejä, erityisesti 100 aa:n tai pitempiä peptidejä. Jos aiot syntetisoida 130 aa:n tai pidemmän sekvenssin, ota meihin yhteyttä mukautetun proteiinin ilmentämis- ja puhdistuspalvelua varten.
Entä jos synteesi- tai puhdistusprosessin aikana ilmenee ongelmia?
RE: Jokaisella peptidillä on omat erityispiirteensä. Jos synteesin aikana ilmenee odotuksiamme suurempia ongelmia, emmekä voi toimittaa peptidiäsi ajoissa, ilmoitamme sinulle mahdollisimman pian. Jos emme pysty valmistamaan peptidiä, sinua ei veloiteta mistään kuluista.
TFA-suolamuoto, asetaatti- tai HCl-suolamuoto: Kumpi muoto minun pitäisi valita?
Oletuksena peptidit syntetisoidaan TFA-suolassa. Solu- tai kudosviljelyyn liittyvissä kokeissa sinun tulee harkita asetaatti- tai HCl-suolan muodossa olevien peptidien tuottamista vähintään 98-prosenttisesti, jotta vältetään epänormaalit vasteet. Asetaatti- tai HCl-suolamuotoa voidaan pyytää lisämaksusta.
Mikä on peptidin säilyvyysaika?
RE: Peptidit ovat stabiileja vähintään vuoden, jos niitä säilytetään kylmäkuivattuna pakastimessa. Jos peptidit liukenevat, säilyvyysaika saattaa lyhentyä. Jos peptidit sisältävät useita reaktiivisia aminohappoja, jotka voivat hapettua, kuten Trp, Met, mutta erityisesti Cys, säilyvyys saattaa myös lyhentyä.
Peptidi sisältää useita kysteiinejä ja voi siksi helposti muodostaa disulfidisidoksia. Miten vältän tämän?
RE: Jos peptidisekvenssi sisältää useita kysteiinejä tai muita reaktiivisia aminohappoja, jotka hapettavat helposti, Biorunstar tarjoaa peptidin toimittamiseen jäännöksillä vahvaa pelkistävää DTT:tä. Peptidi toimitetaan DTT:n kanssa vain, jos asiakas sen erikseen sallii.
Kuinka säilytän synteettisiä peptidejäni?
RE: Useimmat lyofilisoidut peptidit ovat stabiileja huoneenlämmössä 2-3 viikkoa. Pitkäaikaista varastointia varten lyofilisoituja peptidejä tulee säilyttää -20 asteessa. Toistuvia pakastus-sulatusjaksoja tulee välttää. Anna lämmetä huoneenlämpöiseksi ennen avaamista. Peptidiliuosten säilyvyysaika on rajallinen; kerran valmistettu peptidiliuos tulee käyttää mahdollisimman pian.
Mikä on raakapeptidin ja peptidin, josta suola on poistettu, puhtaus? Kuinka puhdistat peptidin? Mitä epäpuhtaudet ovat?
RE: Lyhyille peptideille, joiden normaalit sekvenssit ovat alle 15 aa, se on yleensä 40-60 % HPLC:llä raakalaatuiselle; 50-70 % HPLC:llä suolattomille arvoille. Mitä pidempi peptidi on, sitä alhaisempi puhtaus on raakatuotteelle tai suolattomille. Peptidit puhdistetaan yleensä HPLC:llä käyttämällä vesi- ja asetonitriiligradienttia. Useimmat epäpuhtaudet ovat fragmentteja tai deleetiopeptidejä, peptidejä, joista suojaus on poistettu, ja jäännössuolaa ja vettä.
Peptidin puhtauden selitys HPLC:llä, peptidin kokonaispitoisuus ja kohdepeptidipitoisuus.
RE: Biorunstar toimittaa peptidit lyofilisoidun jauheen bruttopainon mukaan. Lyofilisoitu jauhe sisältää epäpuhtauksia, kuten fragmentteja tai deleetiopeptidejä, peptidejä, joista suojaus on poistettu epätäydellisesti, TFA:ta ja jäännösvettä. Peptidin puhtaus mitataan HPLC:llä. Se on oikean peptidin määrä suhteessa kaikkiin analyytteihin, jotka absorboivat ~214 nm:ssä (peptidisidos absorboi), todennäköisimmin deleetio, katkaisu tai epätäydellisesti poistetut sekvenssit jne. Peptidin puhtaus HPLC:llä ei ota huomioon vettä ja suoloja jotka yleensä ovat näytteessä. Peptidin kokonaispitoisuus on läsnä olevien peptidien prosenttiosuus suhteessa kaikkeen, mitä lyofilisoidussa peptidijauheessa on. Peptidin kokonaispitoisuus määritetään typpipitoisuusanalyysillä. Peptidin tavoitepitoisuus lyofilisoidussa peptidijauheessa voidaan siten päätellä kaavalla: Peptidin kokonaispitoisuus x peptidin puhtaus HPLC:llä.
Mikä on fluoreseiinimerkintämenetelmä?
RE: FITC (fluoreseiini-isotiosyanaatti) on aktivoitu esiaste, jota käytetään fluoreseiinimerkinnässä. Tehokas N-terminaalinen leimaus, seitsemän atomin aminoheksanoyyli
välike (NH2-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-COOH) on sijoitettu fluoroforin (fluoroskeiinin) ja peptidin N-pää. Tämä välike auttaa erottamaan fluoroforin kiinnityskohdasta, mikä mahdollisesti vähentää fluoroforin vuorovaikutusta biomolekyylin kanssa, johon se on konjugoitu, ja tekee siitä helpommin sekundaarisen havaitsemisreagenssin saatavilla.
välike (NH2-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-COOH) on sijoitettu fluoroforin (fluoroskeiinin) ja peptidin N-pää. Tämä välike auttaa erottamaan fluoroforin kiinnityskohdasta, mikä mahdollisesti vähentää fluoroforin vuorovaikutusta biomolekyylin kanssa, johon se on konjugoitu, ja tekee siitä helpommin sekundaarisen havaitsemisreagenssin saatavilla.
Onko biotiinin (tai FITC:n) C-terminaalinen leimaus mahdollista?
RE: Kyllä. Biotiinin (tai FITC:n) C-terminaalinen leimaus tehdään lisäämällä lysiinitähde peptidin C-päähän, ja biotiini (tai FITC) kiinnitetään lysiinin sivuketjuun amidisidoksella. Lysiinin positiivinen varaus poistetaan.
Mikä on sopiva peptidin pituus vasta-ainetuotantoon?
RE: Yleensä 10-25-jäännöspeptidiä suositellaan. Pidemmällä peptidillä voisi olla enemmän epitooppeja, mutta sillä voisi myös olla suurempi mahdollisuus muodostaa stabiileja sekundaarisia rakenteita, jotka eivät ole luontaisia muotoja. Lyhyempi peptidi (<10aa) is generally not good unless there are valid reasons for it, such as potential sequence homology with a related family member or other proteins.
Mikä on MAP?
RE: MAPS tai Multi-Antigenic Peptide on haarautunut peptidi, jossa lineaariset peptidiketjut on kytketty C-päästään polylysiiniytimen kautta, mikä lisää koko molekyylin kokoa. Tämä tehdään peptidien kytkeytymisen eliminoimiseksi KLH:han. Näyttää kuitenkin siltä, että peptidien konformaatio MAP:lla on vähemmän joustavaa, ja MAP:lla saadut vasta-aineet tunnistavat tyypillisesti kohdeproteiinin harvemmin kuin tavanomaisella KLH-konjugaatiolla. Lisäksi MAPS:ia valmistettaessa ei muodostu vapaata peptidiä, mikä vaikeuttaa polylysiiniytimeen suunnattujen vasta-aineiden poistamista. MAPS:n puhdistaminen HPLC:llä on vaikeaa, ja MAPS saadaan ilman massavarmennusta sen heterogeenisyyden ja suuren molekyylikoon vuoksi.
Miksi KLH-konjugoitu peptidiliuokseni näyttää samealta?
RE: KLH eli Keyhole Limpet Hemosyanin on suuri aggregoituva proteiini (MW=4x105 – 1x107). Kokonsa ja rakenteensa vuoksi sen liukoisuus veteen on rajoitettu, mikä aiheuttaa sameaa ulkonäköä. Tämä ei saa vaikuttaa immunogeenisuuteen, ja sameaa liuosta voidaan käyttää immunisaatioihin.
Voitko selittää M+Na- ja M+K-massahuiput MALDI-spektreissä?
RE: On hyvin yleistä nähdä Na (natrium) ja K (kalium) additiot MALDI-spektrissä. Natrium ja kalium ovat peräisin peptidiliuottimissa käytetystä vedestä. Jopa tislatussa ja deionisoidussa vedessä on pieniä määriä natrium- ja kaliumioneja, joita ei voida koskaan poistaa kokonaan. Nämä ionisoituvat MALDI-massaspektriprosessin aikana ja sitoutuvat peptidin vapaisiin karboksyyliryhmiin. Koska ei ole olemassa vedenpuhdistusjärjestelmää, joka poistaisi jokaisen natrium- tai kalium-ionin vedestä, natrium- ja kaliumadduktien näkeminen toisinaan on hyvin yleistä ja väistämätöntä MALDI-massaspektrissä. Tämä ei ole osoitus siitä, että peptidi ei ole puhdas, eikä sitä pidä sekoittaa väärään molekyylipainoon.