Biotiini peptidit

Mitä ovat biotinyloidut peptidit?

Biotinyloidut peptidit ovat peptidejä, joita on modifioitu sisältämään biotiiniosa. Tämä modifikaatio hyödyntää biotiinin ja avidiinin tai streptavidiinin välistä korkeaaffiniteetistä vuorovaikutusta, jota käytetään laajalti biologisissa ja biokemiallisissa sovelluksissa. Biotiinimolekyyli on pieni, stabiili, eikä se muuta merkittävästi peptidin rakennetta tai toimintaa, mutta mahdollistaa erittäin tehokkaan sieppauksen tai havaitsemisen avidiini-pohjaisten järjestelmien avulla.

 

Kemiallinen modifikaatio
Biotiini tuodaan tyypillisesti NHS-biotiini (N-hydroksisukkinimidibiotiini) -reagenssin kautta, joka reagoi peptidin N--päässä olevien primääristen amiiniryhmien tai lysiinitähteiden kanssa muodostaen vakaan amidisidoksen.

生物素(biotiini） 肽（peptidi）

COOH NH2

| |

+---EDC/NHS---→ 活化羧基（aktivointi） → 缩合（kytkentä）

↓ ↓

Biotiini-CONH-peptidi

 

Affiniteettivuorovaikutus
Biotinyloitu peptidi voi sitoutua voimakkaasti (Kd -10-15 M) avidiiniin tai streptavidiiniin, mikä tekee siitä ihanteellisen käytettäväksi määrityksissä, jotka vaativat tarkan havaitsemisen, sieppauksen tai immobilisoinnin.

Biotinyloitujen peptidien synteesitapaukset

Peptidisekvenssi: Biotiini-Ahx-YXXXXXRXRRR-NH2

Pituus: 11A

Purity: >95%

M.W: 1898.32

Peptidisekvenssi: Biotiini-YXXXXXRXRRR--ERXXXDLXXXXPVXXXXPRR

Pituus: 31A

Purity: >95%

M.W: 4145.89

 

Biotinyloitujen peptidien sovellukset

Biotinyloidut peptidit ovat monipuolisia työkaluja tutkimuksessa ja teollisuudessa, ja niillä on laaja valikoima sovelluksia, mukaan lukien:

Affiniteettipuhdistus

Käytetään sitoutumispartnereiden, kuten proteiinien, vasta-aineiden tai nukleiinihappojen, puhdistamiseen immobilisoimalla biotinyloitu peptidi streptavidiinihelmiin.

ELISA ja Western Blotting

Biotinyloidut peptidit toimivat koettimina spesifisten vuorovaikutusten havaitsemiseksi yhdistettyinä avidiini-HRP- tai avidiini-fluoresoiviin leimoihin.

Pintaplasmoniresonanssi (SPR)

Käytetään peptidien immobilisoimiseen biosensorisiruille vuorovaikutustutkimuksia varten.

Huumeiden löytö

Lääkekandidaattien seulominen analysoimalla niiden sitoutumista biotinyloituihin peptidikohteisiin.

Immunologia

Biotinyloituja peptidejä käytetään epitooppien kartoittamiseen, antigeeni{0}vasta-ainevuorovaikutusten tutkimiseen ja T--solumäärityksiin.

Epitooppikartoitus rokotteiden kehittämistä varten

Mukautettua biotinyloitua peptidiä käytettiin virusproteiinin antigeenisten epitooppien tunnistamiseen, mikä auttoi rokoteehdokkaan suunnittelussa.

Proteiini{0}}Proteiinien vuorovaikutustutkimukset

Streptavidiinilla{0}}päällystetyille levyille immobilisoidut biotinyloidut peptidit mahdollistivat reseptori-ligandin vuorovaikutusten tutkimisen, mikä paljasti lääkekehityksen kannalta kriittiset sitoutumisaffiniteetit.

Immunomäärityksen optimointi

Diagnostisessa määrityksessä biotinyloituja peptidejä käytettiin antigeeneinä parantamaan ELISA:n herkkyyttä ja spesifisyyttä sairauden biomarkkerien havaitsemiseksi.

 

Viitteet

1. Green, NM (1975).Avidiini ja streptavidiini.Biochemical Journal, 131(3), 781-791.

2. Chaiet, L., & Wolf, FJ (1964).Streptomycesin tuottaman biotiinia{0}}sitovan proteiinin streptavidiinin ominaisuudet.Archives of Biochemistry and Biophysics, 106(1), 1-5.

3. Finn, FM, & Titus, G. (1994).Proteiinien biotinylaatio tutkimuksessa ja bioteknologiassa.Anal Biochem, 218(1), 1-7.