Peptidisynteesiprosessin yleiset ongelmat ja ratkaisut sisältävät seuraavat näkökohdat:
Peptidipitoisuus: Peptidipitoisuus viittaa näytteessä olevien peptidiaineiden prosenttiosuuteen verrattuna muihin kuin peptidiaineisiin. Peptidituotteisiin sisältyvät itse peptidin lisäksi myös tuotantoprosessin aikana lisätyt suolattomat komponentit, kuten vesi, imeytyneet liuottimet, koordinaatioionit ja suolat
Kemiallinen stabiilisuus:
Deamidaatioreaktio: Asn/Gln-tähteet hydrolysoituvat helposti muodostaen Asp/Glu:ta.
Hydrolyysi: Peptidisidokset peptideissä katkeavat helposti hydrolyysillä, erityisesti ne, jotka muodostuvat Asp:n osallistumisesta, erityisesti Asp Pro- ja Asp Gly -peptidisidokset.
Rasemisointireaktio: Kaikissa aminohappotähteissä paitsi Gly:ssä on kiraalisia alfa-hiiliatomeja ja ne ovat alttiita rasemisoitumisreaktiolle alkalisen katalyysin aikana. Asp-tähteet ovat alttiimpia rasemointireaktioihin.
- eliminoituva hajoaminen: Cys, Ser, Thr, Phe, Tyr ja muut jäännökset voivat kaikki hajota - eliminaatiolla, joka tapahtuu todennäköisemmin alkalisessa pH:ssa ja johon lämpötila ja metalli-ionit vaikuttavat
Fyysinen vakaus:
Denaturaatio, adsorptio, aggregaatio tai saostuminen: Peptidin denaturaatio liittyy yleensä tertiääristen ja sekundaaristen rakenteiden tuhoutumiseen. Denaturoidussa tilassa peptidit ovat alttiimpia kemiallisille reaktioille ja niiden aktiivisuutta on vaikea saada talteen. Denaturaatioprosessin aikana muodostuva välituote liukenee vähän ja se on altis aggregoitumiselle ja saostumiselle
säilytys:
Parhaat säilytysolosuhteet: Peptidit varastoidaan yleensä pakastekuivattuna jauheena, joka on erittäin stabiili -20 asteessa, erityisesti pakastekuivauksen jälkeen ja säilytetään -20 asteen kuivausrummussa. Useimpia peptidejä voidaan säilyttää tässä lämpötilassa useita vuosia ilman muutoksia. Kosteuden vaikutuksen vähentämiseksi pakastekuivatut peptidit tulee palauttaa huoneenlämpötilaan kuivissa olosuhteissa ennen kuin ne altistetaan ilmalle.
Pakkaus: Hesheng Biotechnology suosittelee pientä pakkaamista, jotta vältetään toistuvia pakastus-sulatusjaksoja, vähennetään säiliön aukkojen ja sulkujen määrää, mikä vähentää virheellisen käsittelyn tai bakteerikontaminaation mahdollisuuksia ja varmistaa peptidien stabiilisuuden.
Puhtaustesti:
Puhtaustakuu: Kaikki toimitetut peptidit ovat saavuttaneet vaaditun puhtauden, ja peptidit, jotka eivät täytä standardia, hylätään. HPLC- ja MS-detektiotulokset voivat varmistaa peptidin puhtauden ja molekyylipainon samalla kun ne näyttävät tärkeimmät epäpuhtaudet.
Muut havaitsemismenetelmät, kuten aminohappoanalyysi tai alkuaineanalyysi, voivat vahvistaa peptidien aminohappokoostumuksen lisäkeinona peptidin vahvistukselle.
Synteesitekniikka:
Kiinteäfaasipeptidisynteesi: Kiinteän faasin peptidisynteesi ei vaadi välituotteiden puhdistamista, mikä mahdollistaa jatkuvat synteesiprosessit ja luo perustan peptidisynteesin automatisoinnille. Fmoc-kemiallisen synteesin perusteella kohdepeptidi syntetisoitiin liittämällä kovalenttisesti C-terminaalisen aminohapon karboksyyliryhmä liukenemattomaan polymeerihartsiin ja aloittamalla sitten aminohapon aminoryhmästä.
Yllä oleva sisältö tiivistää peptidisynteesin yleiset ongelmat ja vastatoimenpiteet kattaen useita näkökohtia, kuten kemiallisen stabiilisuuden, fysikaalisen stabiilisuuden, säilytysolosuhteet, puhtaustestauksen jne.